A Stanford Egyetem tudományos munkatársaként (1937-41) Beadle-lel együtt igyekezett kísérletileg bizonyítani a következő tételeket: az összes élőlény összes biokémiai folyamatát végső soron a gének határozzák meg; e folyamatok mindegyike egyedi, szekvenciális kémiai reakciók sorozatára bontható (biokémiai útvonalak); minden egyes reakciót egy adott gén szabályoz valamilyen módon; egyetlen gén mutációja a sejtnek csupán egy adott kémiai reakció lebonyolítására való képességét változtatja meg.
A Neurospora crassa nevű vörös kenyérpenésszel végzett kísérletek során Tatum és munkatársai bebizonyították, hogy ha egy genetikai mutáció kimutathatóan befolyásol egy bizonyos kémiai reakciót, akkor a kérdéses reakciót katalizáló enzim módosul vagy hiányozni fog. Ezzel tehát igazolták, hogy minden egyes gén egy bizonyos enzim szerkezetét határozza meg valamilyen módon (ez az ún. "egy gén - egy enzim" hipotézis).
A Yale Egyetem professzoraként (1945-48) sikerült baktériumokra is alkalmaznia a Neurospora génmutációinak kiváltására és biokémiai folyamatainak tanulmányozására használt módszereit. Lederberggel közösen felfedezték, hogy az Escherichia coli-baktérium K12 jelű törzsénél genetikai rekombináció megy végbe, vagyis egyfajta ivaros szaporodás. Nagyrészt az ő munkájuknak köszönhető, hogy a biokémikusok a sejtekben zajló folyamatok genetikai szabályozásáról azóta is főként a baktériumok tanulmányozása révén szerzik az ismereteket.
Tatum 1948-ban visszatért a Stanford Egyetemre, majd 1957-ben
a New York-i Rockefeller Orvostudományi Kutatóintézet
(a mai Rockefeller Egyetem) munkatársa lett.